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标准NLuc(NanoLuc)荧光素酶检测试剂盒的完整结构组成(单荧光/双荧光通用,含Promega原装与国产主流配置)。
一、核心组成(单荧光试剂盒,如 Nano-Glo® 单检)
1)NLuc 检测缓冲液(NLuc Assay Buffer)
形态:透明液体(1×,直接用)
规格:10mL/50mL/100mL 不等
成分:
pH 7.4-8.0 缓冲体系(HEPES/Tris)
稳定剂(保护 NLuc 酶活性)
去污剂(温和裂解细胞,释放胞内 NLuc)
氧气供给/抗氧化体系(保证发光稳定)
作用:提供 反应环境+细胞裂解+稳定发光
2)NLuc 检测底物(NLuc Substrate,Furimazine)
形态:冻干粉或 50×浓缩液
规格:200μL(50×)/ 1mL(50×)/ 冻干粉 1 瓶
成分:Furimazine(呋喃嗪,腔肠素类似物),无 ATP(NLuc 不依赖 ATP)
作用:被 NLuc 催化氧化,发射~460nm 蓝光(辉光型,稳定 30-60min)
3)工作液(临用前配制)
配比:缓冲液 : 底物(50×)= 49 : 1
即:1mL缓冲液+20μL 50×底物 → 1×工作液
特点:单次添加、无需避光、室温稳定
4)辅助组分(标配)
说明书:原理、流程、配方、储存、 Troubleshooting
合格证/质检报告:活性、灵敏度、线性范围
(可选)被动裂解液(PLB):针对难裂解细胞,单独裂解后再检测
二、双荧光试剂盒(NLuc+萤火虫/海肾,如 Nano-Glo® Dual-Luciferase)
在单荧光基础上增加内参检测体系(通常为萤火虫 Fluc 或海肾 Rluc):
1. ONE-Glo™ EX 缓冲液 + 底物:检测萤火虫荧光素酶(Fluc),550-580nm
2. NanoDLR™ Stop & Glo 缓冲液 + 底物:
终止 Fluc 信号
同时启动 NLuc 信号(460nm)
3. 用途:Fluc=报告基因;NLuc=内参(校正转染效率)
三、储存与关键参数
缓冲液:4℃1年/室温3个月
底物:-20℃ 避光,避免反复冻融
发光特点:ATP 非依赖、150×亮于萤火虫、稳定性强、pH 7-9全活性
标准NLuc试剂盒=检测缓冲液(含裂解/稳定)+Furimazine 底物(50×)+说明书;双荧光版再加萤火虫/海肾内参体系。