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NLuc荧光素酶检测试剂盒的使用注意事项
一、试剂储存与配制
检测缓冲液4℃避光保存，底物-20℃冷冻避光，严禁反复冻融，分装冻存更佳。
工作液现配现用，按比例混匀后室温放置片刻再使用，配制后尽量1小时内用完。
所有试剂避免强光直射、高温环境存放，防止底物氧化失活。
二、样本处理注意
细胞样本尽量去除培养基上清、血清、酚红等杂质，避免干扰发光信号。
样本收集后尽快检测，暂存置于冰上，不可长时间室温放置，防止NLuc酶活性下降。
悬浮细胞、组织样本需充分裂解，确保荧光素酶完全释放，避免数值偏低。
避免样本中混入强氧化剂、强还原剂、高浓度重金属离子，抑制酶促发光反应。
三、实验操作规范
加样顺序统一，先加样本再加发光工作液，保证所有样本反应条件一致。
加液后轻柔混匀，不要剧烈震荡，防止液体溅出与孔间交叉污染。
室温条件下进行发光反应，避开低温/高温环境，保证反应速率统一。
严格控制反应时间统一读数，利用其辉光稳定特性，尽量同一时段完成整板检测。
全程佩戴手套、口罩，避免皮肤与口鼻直接接触试剂，防止刺激。
四、仪器检测要求
提前预热多功能酶标仪/发光检测仪，设置检测模式为化学发光模式，关闭激发光源。
提前校正仪器参数，统一曝光时长、增益值，保证组间数据可对比。
避免微孔板外壁沾有液体、指纹，防止透光异常造成读数误差。
空白孔、阴性对照、阳性对照必须同步设置，用于扣除背景值。
五、体系兼容性禁忌
避免与高浓度EDTA、强酸碱、高浓度去污剂混用，会破坏NLuc酶空间结构。
不可混用萤火虫荧光素酶检测底物与缓冲液，两类体系成分互斥，严重干扰结果。
含ATP的缓冲液不建议随意添加，虽NLuc不依赖ATP，但易抬高背景信号。
药物筛选实验中，确认受试化合物无自发荧光、无自发发光，避免假阳性。
六、活体成像特殊注意
动物活体实验前把控底物给药剂量与给药方式，统一给药时长再成像。
避免动物毛发、体表污渍遮挡发光部位，降低成像背景干扰。
活体观测尽量缩短观测时长，减少动物应激反应影响实验数据。
七、其他通用事项
试剂盒 科研实验使用，不可用于临床体外诊断。
实验废液、废弃试剂按生化实验废弃物规范处理，不可随意倾倒。
不同批次试剂盒尽量不要混用，防止组分差异带来实验偏差。
实验全程做好平行复孔，减少操作误差，保证数据重复性。