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萤火虫荧光素酶检测试剂盒的使用注意事项
一、试剂储存与配制
试剂盒整体4℃避光保存，底物组分严禁冷冻结冰，避免活性失效。
裂解液、反应缓冲液避免反复开盖久置，防止挥发与污染。
发光工作液现配现用，混匀后室温静置平衡温度，尽量30分钟内用完。
所有试剂全程避光存放，光照会加速底物分解、降低发光强度。
二、样本处理要点
吸净细胞培养液、血清、酚红、抗生素等杂质，这类物质会抑制发光反应、抬高背景。
细胞/组织样本收集后尽快检测，暂放冰上，不宜长时间室温放置，防止荧光素酶失活。
贴壁细胞充分裂解，确保酶完全释放；裂解后避免剧烈吹打产生大量泡沫，影响读数。
样本避免混入高浓度重金属离子、强氧化剂、强酸强碱，直接抑制酶活性。
三、实验操作规范
统一加样顺序，先加样本再加发光试剂，保证所有样本反应条件一致。
加样后轻柔混匀，禁止剧烈震荡，防止液体飞溅、孔间交叉污染。
严格控制反应温度，优先室温或25℃恒温操作，温度波动会造成发光值偏差。
闪光型发光衰减快，统一等待相同时间立即读数，减少时间差带来的数据误差。
全程佩戴实验手套，避免皮肤接触试剂，防止刺激与样本污染。
四、仪器检测要求
酶标仪调至化学发光检测模式，关闭激发光与滤光片干扰。
提前预热仪器，统一曝光时长、增益参数，整板参数保持一致。
微孔板外壁擦干无污渍、无指纹，避免透光异常造成读数不准。
必须设置空白对照、阴性对照，扣除本底发光值，保证结果真实有效。
五、反应体系禁忌
体系不可缺少Mg²⁺、ATP，缺失任一成分会直接无发光信号。
慎用高浓度EDTA，会络合镁离子，直接阻断发光反应。
不要混用NLuc检测试剂与底物，两类体系成分互斥， 干扰实验结果。
受试药物、干预化合物提前排查，排除自身自发发光、荧光淬灭物质。
六、双报告实验专属注意
先完成萤火虫荧光素酶读数，再加入终止&海肾检测试剂，顺序不可颠倒。
确认前序发光信号完全熄灭后，再读取内参光值，避免信号串扰。
内外参实验复孔数量一致，统一换算比值，消除转染效率误差。
七、活体成像配套注意
选用D-荧光素钾盐配制底物溶液，保证水溶性适配活体注射。
底物注射后严格统一等待成像时间，保证体内反应进度一致。
动物实验做好避光处理，减少环境光对成像结果的干扰。
八、其他通用禁忌
本产品仅用于科研实验，严禁用于临床体外诊断。
不同批次试剂盒不随意混用，避免组分差异导致实验数据波动。
实验废液按照生化危险废弃物规范处理，不可随意倾倒。
避免试剂受潮、冻融，开封后尽快用完，减少活性损耗。